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FEN1 是经构建特殊融合表达载体，转化宿主工程菌发酵表达、精制纯化而成，无核酸及核酸酶残留。FEN1 可催化双链 DNA 底物位点 5' DNA flaps 的切割，形成 5'磷酸末端，其切割产物，可以通过 DNA 连接酶连接，以产生双链 DNA。在细胞内，FEN1 是冈崎片段成熟途径的重要参与者，在碱基切除修复中也发挥作用。
| 组分 |
E208 (1,600 U) |
|
FEN1 (32 U/µl)
|
50 μl |
|
10 × FEN1 Buffer
|
2 × 750 μl |
-20℃保存，于-20 ~ 0℃运输。▲避免反复冻融。
65℃ 孵育 1 h，得到如 Fig.1 所示结果
注：Tatget ssDNA (43 nt): 单链靶标 DNA；UP (26 nt): 5’端 24 nt 与 Tatget ssDNA 上游的 5’端互补，3’端剩余碱基 2 nt 与 Tatget ssDNA 不互补的引物；DP (40 nt): 5’端 21 nt 与 Tatget ssDNA 上游的 5’端不互补，3’端剩余碱基 19 nt 与 Tatget ssDNA 互补的引物。
结论：
由 A 和 B 两组实验结果发现，添加 FEN1 后可特异性切割产生游离的 flap 片段。
RNase 残留检测：20 U 本品和 1 μg Hela 细胞总 RNA 在 37℃下孵育 30 min，RNA 的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留 DNA 残留检测：50 μl 体系中，以 ddH2O 为模板，扩增 E. coli 16 s rDNA 基因。30 个循环后 进行 1%琼脂糖凝胶电泳，染色，无扩增条带。
关键词:
【E208】FEN1
FEN1
flap 切割
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